ImmunoDip™ Urinary Albumin Test

Tira reactiva para determinación
de microalbúmina en orina

InmunoDip* DCL
------------------------------------------------------------------------
Tira reactiva para la determinación semicuantitativa in vitro de microalbuminuria

ImmunoDip™ Urinary Albumin Test es una tira reactiva que detecta la presencia de concentraciones ligeramente elevadas de albúmina en orina. La albúmina urinaria elevada en mínimas concentraciones también se le conoce como microalbuminuria y es un signo temprano de posible daño renal. La determinación de albúmina urinaria elevada puede ser útil en la detección temprana y monitoreo del curso de una nefropatía incipiente en pacientes diabéticos e hipertensos. Para uso diagnóstico in vitro.

PRECAUCIONES

• No se utilice después de la fecha de caducidad.
• La tira reactivo ImmunoDip™ Urinary Albumin Test debe usarse dentro de las primeras 4 horas de haberla retirado de su empaque. Cualquier persona que pueda leer y comprender las instrucciones de la prueba pueden llevarla a cabo.
• Deben seguirse las instrucciones para obtener resultados precisos. La prueba debe llevarse a cabo a temperatura ambiente.
• Deben seguirse las "precauciones universales" recomendadas por el Centro para el Control de Enfermedades cuando se manipulen líquidos corporales como la orina. Estas precauciones incluyen el uso de guantes desechables. S20/21: Mientras se utilice la tira, no se debe comer, beber o fumar. S35: La tira debe desecharse de manera segura.

RESUMEN DE LA PRUEBA

Existen diversos padecimientos renales que pueden producir concentraciones elevadas de albúmina en la orina (1). Resulta útil la detección de albúmina en orina a las concentraciones bajas determinadas por esta prueba para la detección temprana y tratamiento de pacientes con nefropatías. Las concentraciones de albúmina urinaria ligeramente elevadas, o microalbuminuria, se refieren a un nivel de albúmina humana en la orina por arriba de los 18 mg/L. Las concentraciones superiores a los 18 mg/L no suelen encontrarse normalmente en personas sanas. Estas concentraciones bajas, pero importante, no son detectables con los análisis realizados con otras tiras convencionales.

ImmunoDip™ Urinary Albumin Test clasifica las muestras como positivas o negativas con base en si se encuentran por arriba o por debajo de los 18 mg/L. Los padecimientos en los cuales pueden presentarse concentraciones elevadas de albúmina en la orina incluyen: diabetes Tipo 1 y Tipo 2 (2-8); hipertensión (9,10) y nefropatía en el embarazo (11). También existen otras causas menos comunes. La diabetes es la principal causa. Un estudio estableció que 45% de los diabéticos dependientes de insulina desarrollaron nefropatía grave (3). El análisis de concentraciones elevadas de albúmina en orina ayuda a identificar aquellos pacientes diabéticos propensos a una enfermedad renal. Estudios científicos indican que el control adecuado de las concentraciones de glucosa sérica y de la presión sanguínea ayudan a reducir o prevenir una enfermedad renal (1,9).

PRINCIPIO

ImmunoDip™ Urinary Albumin Test determina la concentración de la albúmina urinaria en un dispositivo de flujo lateral que contiene anticuerpos monoclonales específicos contra la albúmina humana. Dentro del dispositivo se encuentran un conjugado de anticuerpos marcados así como antígenos y anticuerpos inmovilizados. La albúmina presente en la orina se fija a las partículas de látex coloridas de azul presentes en la tira. Esta fijación es producida por las moléculas de anticuerpos unidas a las partículas. Estas partículas y la muestra de orina se mezclan cuando la tira se sumerge en la orina. Estas son trasladadas hacia la parte superior de la tira por una acción de captura.

La tira tiene albúmina humana fijada en la banda inferior de las dos bandas que contiene la tira. A concentraciones bajas de albúmina en la muestra, estas patículas azules se fijan a la banda de la albúmina. Esto produce una banda de color azul en la mitad inferior de la ventana de prueba. La ventana de prueba tiene una segunda banda que puede fijar las partículas coloridas. Las partículas coloridas son fijadas por la segunda banda aún cuando hayan reaccionado con la albúmina en la orina. Cuando hay un nivel bajo de albúmina en la orina, la mayor parte de las partículas se fijarán a la banda inferior. Sin embargo, parte de las partículas reaccionarán con la pequeña cantidad de albúmina presente. Estas partículas traspasarán la banda inferior y se fijarán a la banda superior. Esto produce una segunda banda azul. Conforme mayor sea la cantidad de albúmina en la orina, más partículas atravesarán la primera banda y se fijarán en la segunda. Después de 3 minutos, se compara el oscurecimiento o intensidad de las dos bandas azules en la ventana de prueba.

Si el color en la banda de la parte superior de la ventana de prueba es ligeramente mayor o igual a la banda inferior, la prueba es negativa. Por negativa se entiende que hay una concentración normal de albúmina en la muestra de orina analizada. Si la banda en la parte superior de la ventana de prueba es más oscura que la banda inferior, entonces la prueba es positiva. Por positiva se entiende que hay más albúmina en la muestra de orina analizada que la que se encuentra en una orina normal. En la sección de "Instrucciones para la tarjeta de uso" se encuentran instrucciones detalladas para la lectura de los resultados.

PREPARACIÓN, ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DEL REACTIVO

ImmunoDip™ Urinary Albumin Test está listo para su uso y es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja y empaque. Almacénece a 18-26°C. Aun cuando puede ser refrigerado, no es necesario a menos que la temperatura ambiente exceda los 26°C. La tira es estable por 4 horas después de haber sido retirada de su envoltura.

EQUIPO Y MATERIALES

Materiales proporcionados

• 25 ImmunoDip™ Urinary Albumin Test envueltas individualmente: ImmunoDip™ Urinary Albumin Test es una tira reactiva inmunocromatográfica. Contiene anticuerpos monoclonales contra la albúmina sérica humana fijados a partículas coloridas. La albúmina humana se fija a una banda en la mitad inferior de la región de prueba. Los anticuerpos de cabra anti-murinos se fijan en una banda en la mitad superior de la región de prueba. La tira también contiene componentes amortiguadores y estabilizadores en los sustratos de la tira.
• Un inserto del paquete
• Unas Instrucciones de la tarjeta de uso a ser utilizadas después de una revisión completa de todo el inserto del producto.

Materiales requeridos

Reloj o cronómetro (para medir 3 minutos) y un recipiente limpio para recolección de muestra. El usuario puede adquirir el DCL Microalbuminuria Controls (Cat. No. SM-252) para hacer verificaciones de control de calidad externas.

MUESTRA

Orina fresca a temperatura ambiente es la muestra de elección. Se recomienda la primera orina de la mañana. La American Diabetes Association recomienda que al menos dos de tres recolecciones de orina en un periodo de 3-6 meses debieran mostrar concentraciones elevadas antes de establecer el que el paciente haya presentado una microalbuminuria.

No congele las muestras de orina antes de su análisis y no utilice muestras de orina con conservadores. Se prefiere la orina fresca pero, si es necesario, la orina puede refrigerarse hasta por 3 días. Deje que la orina alcance la temperatura ambiente antes de analizarla. También, la orina fresca debiera enfriarse a la temperatura ambiente antes de analizarla.

Información adicional sobre los procedimientos de escrutinio está disponible en la American Diabetes Association* y la National Kidney Foundation**.

* Diabetes Care, Vol 25, Suppl 1, January 2002, pp S85-S89.
** American Journal of Kitney Diseases, Vol. 39, No. 2, Supl. 1, February 2002, pp S17-S31.

LIMITACIONES E INTERFERENCIA

Limitaciones

La cantidad de albúmina excretada en la orina puede variar por diversas razones en las personas sanas. Cambios en la postura, actividad física extenuante, presión sanguínea elevada y embarazo pueden influir el nivel de albúmina en la orina. La tira ImmunoDip™ Urinary Albumin Test puede ayudar a detectar estas condiciones pero no puede diferenciarlas. La tira detectará albúmina elevada en la orina. Esto es solo parte del diagnóstico médico de cualquiera de las condiciones que puedan producir dicha elevación de la albúmina urinaria.

La albúmina urinaria fluctúa día a día; por tanto, el analizar dos muestras por separado durante un periodo de 3 a 6 meses puede aumentar el valor predictivo, donde dos muestras positivas son indicativas de nefropatía incipiente. Pueden estar indicados procedimientos cuantitativos para seguimiento de la prueba.

Antes de correr la prueba, revise con cuidado el siguiente cuadro para asegurarse de que la prueba ser correcta.

Si en la región de prueba no se observa color después de 3 minutos a pesar de la inmersión profunda correcta y la ausencia de una burbuja de aire, verifique que no haya expirado la caducidad de la tira ImmunoDip™ Urinary Albumin Test. Determine si las tiras pudieran haber estado expuestas a calor o frío extremos. Si ocurrieron cualquiera de estas condiciones, suspenda el análisis con estas tiras. Abra una nueva caja cuyas tiras no hayan expirado su fecha de caducidad y vuelva a efectuar el análisis.

Interferencias

Se ha determinado reactividad cruzada potencial con medicamentos comunes y diversas proteínas humanas. Las tiras ImmunoDip™ Urinary Albumin Test fueron analizadas con medicamentos comunes y algunas proteínas humanas a concentraciones normales y anormales utilizando dos muestras de orina con niveles negativo y positivo de microalbuminuria.

No se ha encontrado reactividad cruzada o interferencia con: (Analizado a 20 mg/dL) Acetaminofén, Acido ascórbico, Cafeína, Acido gentísico, Ampicilina, Tetraciclina; (a 2 g/dL) D-glucosa; (a 1 mg/dL) Hemoglobina; (a 100 mg/dL) oxitetraciclina; (a 0.2 mg/dL) a-1-Glicoproteína ácida; (a 0.22 g/dL) Acido b-hidroxibutírico; (a 0.1 g/dL) Acido úrico; (a 10 g/dL) Urea; (a 75 mg/dL) Acetona; (a 4000 U/L) a-Amilasa; (a 0.012 g/L) a-1-Antitripsina; (a10 mg/dL) holo-Transferrina; (a 100 mg/dL) Calcio; (a 400 mg/dL) Acido salicílico, Acido acetilsalicílico y (a 0.43 mg/dL y 0.86 mg/dL) Piridio.

INSTRUCCIONES DE LA PRUEBA

Retire, Coloque, Verifique, Espere y Lea.

Estos pasos están detallados con las ilustraciones en las Instrucciones para la tarjeta de uso.

1. Retire: Después de obtener la muestra de orina ya puede desenvolver la tira ImmunoDip™ Urinary Albumin Test en preparación para su uso.

• Si la muestra de orina o la tira ImmunoDip™ Urinary Albumin Test han sido refrigerados, espere a que alcancen la temperatura ambiente antes de continuar.

2. Coloque: Sumerja la tira ImmunoDip™ Urinary Albumin Test en la muestra de orina. Introduzca la tira hasta el fondo del recipiente con orina para evitar las burbujas de aire en el contenedor de plástico.

3. Verifique: Verifique que la orina rebase la señal P de la tira ImmunoDip™ Urinary Albumin Test como se indica en el diagrama de las Instrucciones de la tarjeta de uso.

4. Espere: Espere por al menos 3 minutos pero no más de 8 horas antes de retirar la tira para su lectura.

• Si no se desarrolla color en la mitad superior de la ventana de prueba después de 3 minutos, una burbuja de aire pudo haber bloqueado la entrada de líquido en el contenedor de la prueba. Agite la tira reactiva para eliminar la burbuja de aire y vuelva a verificar en tres minutos más.
• Retire la tira IImmunoDip™ Urinary Albumin Test del recipiente de orina en cualquier momento después de 3 minutos mínimo. Colóquela en una superficie relativamente plana o soporte vertical hasta que lea el resultado.

5. Lea: Lea la tira de acuerdo con las Instrucciones de la tarjeta de uso.

• Para mejores resultados, lea la tira antes de las primeras 8 horas.

RESULTADOS

• Los resultados se interpretan utilizando los esquemas de las Instrucciones de la tarjeta de uso.
• Una prueba positiva da un resultado con la banda superior más oscura.
• Una prueba negativa da un resultado con las dos bandas iguales o la banda inferior más oscura.
• La ausencia de cualquiera de las bandas o de una banda superior debe reportarse como Prueba invalidada.
• Si no hay color en la banda inferior, esto indica una concentración de albúmina muy alta (al menos 160 mg/L). Es raro encontrar concentraciones tan alta como ésta en personas que desconocen que tienen albuminuria.
• En el caso de una Prueba invalidada, debe repetirse la prueba con una nueva tira y si persiste el problema, contacte al departamento técnico de DCL.
• La tira ImmunoDip™ Urinary Albumin Test está diseñada para identificar concentraciones elevadas de albúmina en la orina. En la mayor parte de los casos, los resultados positivos deben someterse a una interpretación médica y/o a una prueba diagnóstica posteriores.

CALIBRACIÓN

No se requiere que el usuario realice una calibración de las tiras ImmunoDip™ Urinary Albumin Test.

CONTROL DE CALIDAD

Control integrado

Las tiras ImmunoDip™ Urinary Albumin Test contienen un control integrado. La recomendación del fabricante para el control de calidad es hacer notar que el control se ha llevado a cabo adecuadamente para cada tira utilizada. Durante la prueba, la tira mostrará en el frente un movimiento visible del líquido que contiene las partículas azules. Esto debe suceder dentro de los primeros 60 segundos de haberla colocado en la muestra de orina a la profundidad adecuada.

La tira debe desarrollar una banda de color azul en la sección superior de la ventana de prueba 3 minutos después de haberse colocado en la orina. Si no se desarrolla la línea superior el resultado de la prueba debe invalidarse. Las bandas azules deben ser rectas y razonablemente uniformes. No deben presentarse marchas o puntos de color importantes. Si cualquiera de las características del control integrado no funcionan como se describió, la muestra debe ser analizada con otra tira. Si la segunda tira también fracasa contacte al departamento técnico de DCL.

Consideraciones generales de control de calidad

Antes de analizar las muestras, verifique la "Fecha de caducidad" de la caja o de las envolturas. Si el producto ha expirado, deseche y no utilice las tiras. Si las muestras fueros analizadas con tiras caducadas, no reporte los resultados.

Por favor, consulte las secciones de Limitaciones / Interferencias y Almacenamiento / Estabilidad de este inserto.

Controles externos

Además de los propios procedimientos estándar de control de calidad del laboratorio, DCL recomienda correr controles positivos y negativos al abrir la primera caja de cada nuevo número de lote o al recibir un nuevo paquete. Los controles externos positivo y negativo se usan para asegurar que la tira funcione correctamente. Para este propósito, DCL dispone del Microalbumin Urine Controls (Cat. No. SM-252) que contienen materiales de control tanto positivo como negativo.

Para analizar los controles positivo y negativo, siga las instrucciones de ImmunoDip™ Urinary Albumin Test utilizando los controles en lugar de una muestra de orina. El control positivo debe dar un resultado con la banda superior más oscura que la banda inferior. El control negativo debe dar un resultado con dos bandas de igual intensidad o la banda inferior más oscura. Si la prueba no se lleva a cabo como se indica, verifique las instrucciones y repita la prueba. Si las pruebas repetidas no funcionan correctamente contacte al departamento técnico de DCL.

VALORES ESPERADOS Y RANGO DE ANÁLISIS

Las tiras ImmunoDip™ Urinary Albumin Test detectan un rango de concentraciones de albúmina urinaria de 1 a > 2500 mg/L. La concentración de albúmina de una muestra de orina promedio de una persona sana no debe exceder de un valor aproximado de 18 mg/L (7). Excepto por las limitaciones establecidas anteriormente, las personas sanas mostrarán un resultado negativo.

Una prueba de albúmina en orina NEGATIVA es un resultado en el cual la banda azul inferior es o más oscura o igualmente intensa que la banda azul superior. Un solo resultado negativo (< 18 mg/L) no excluye todas las enfermedades renales (1).

Una prueba de albúmina urinaria POSITIVA es un resultado en el cual la banda azul superior es más oscura que la banda azul inferior. Un solo resultado positivo (> 18 mg/L) puede ser un indicador temprano de nefropatía e indica la necesidad de un análisis posterior. Cuando se detecta microalbuminuria (> 18 mg/L) en al menos dos de tres muestras de orina de la mañana, es una indicación de nefropatía diabética clínica (11).

CARACTERÍSTICAS DE FUNCIONAMIENTO

Estudios de precisión

Se llevó a cabo un estudio de precisión de 20 días con dos operadores y dos observadores utilizando dos diferentes niveles de orina. Cada nivel de orina se corrió por duplicado y fue interpretado por cada operador. Se asignó un observador a cada operador para la interpretación independiente de cada prueba. A partir de este estudio se determinó la precisión durante el día, entre cada día, durante la corrida y entre corridas.

La precisión durante el día se estableció al analizar dos niveles de orina ocho veces cada una. Hubo dos operadores y dos observadores para un total de 16 observaciones por nivel. Resultados: 16 observaciones correctas, 100% de precisión.

Nivel (mg/L) Tiras Observaciones Correctas % Correctas 8 8 16 16 100 50 8 16 16 100

La precisión entre días se estableció mediante el análisis de dos niveles de orina ocho veces cada una por 20 días. Hubo dos operadores y dos observadores para un total de 320 observaciones por nivel. Resultados: 320 observaciones correctas, 100% de precisión.

Nivel (mg/L) Tiras/día Días Total tiras Observaciones Correctas % Correctas 8 8 20 160 320 320 100 50 8 20 160 320 320 100

La precisión durante una corrida se estableció mediante el análisis de dos niveles de orina 40 veces cada. Hubo dos operadores y dos observadores para un total de 80 observaciones por nivel. Resultados: 80 observaciones correctas, 100% de precisión.

Nivel (mg/L) Tiras/día Observaciones Correctas % Correctas 8 40 80 80 100 50 40 80 80 100

La precisión entre corridas se estableció mediante el análisis de dos niveles de orina 4 veces por corrida, dos veces al día por 20 días. Hubo dos operadores y dos observadores para un total de 320 observaciones por nivel. Resultados: 320 observaciones correctas, 100% de precisión.

Nivel (mg/L) Tiras/corrida Corridas Total tiras Observaciones Correctas % Correctas 8 4 40 160 320 320 100 50 4 40 160 320 320 100

Desempeño esperado en multiusuarios

Tres diferentes grupos de usuarios no entrenados analizaron 339 muestras. Se analizaron iguales números de muestras de 5 mg/L, 15 mg/L y 36 mg/L. La concordancia global para usuarios no entrenados y los profesionales fue idéntica. La concordancia real de los usuarios entrenados y los profesionales para resultados correctos fue de 96%.

Resumen de los resultados por usuarios no entrenados y los profesionales

Usuarios no entrenados Usuarios profesionales Global Correctas/Total % Correctas Correctas/Total % Correctas Grupo A 106/109 97% 116/120 97% Grupo B 108/116 93% 118/120 98% Grupo C 113/114 99% 112/120 93% Global 327/339 96% 346/360 96%

Estudios de laboratorio en consultorio

Se llevó a cabo una evaluación de ImmunoDip™ Urinary Albumin Test en tres consultorios utilizando un panel de muestras de orina con concentraciones conocidas de albúmina. Las pruebas las realizaron el personal médico con diversa experiencia en pruebas a pacientes. El panel contenía muestras con 4.5 mg/L, 9.0 mg/L, 15 mg/L, 22 mg/L 36 mg/L y 72 mg/L. Cada nivel de muestras se analizó en réplicas de 15 en cada sitio por un periodo de 5 días. Las muestras fueron analizadas en orden aleatorio sin que el coordinador del estudio revelara la identificación de nivel de muestra. Los resultados mostraron una concordancia global de 91% dentro de un rango de 89-94%.

Esto no fue significativamente diferente de los resultados observados con los técnicos entrenados quienes reportaron resultados globales con exactitud de 95% en un rango de 93-97%. El mayor número de desviaciones de los resultados esperados se observaron en los dos niveles de muestra cercanos al nivel de 18 mg/L que separa los resultados positivo y negativo. Excluyendo los 15 y 22 mg/L, ambos grupos excedieron la exactitud de 98%. No se observaron diferencias importantes durante una corrida (15 replicas), entre corridas (5 días diferentes) o entre sitios (3 consultorios).

Los resultados se resumen en la siguiente tabla:

Clasificación de la muestra Usuarios en el consultorio Técnicos entrenados Llamadas correctas % Correctas Llamadas correctas % Correctas < 15 mg/L 89/90 99% 90/90 100% 15-22 mg/L 68/90 76% 76/90 84% >22 mg/L 88/90 98% 90/90 100%

Estudio clínico

Se llevó a cabo una evaluación multi-centro de ImmunoDip™ Urinary Albumin Test para determinar la efectividad clínica con respecto a las técnicas del laboratorio clínico (BeckmanTM Array). Se corrieron un total de 278 muestras de orina las cuales se obtuvieron tanto de un grupo de personas adultas sanas (78) y de muestras enviadas al laboratorio clínico de un hospital para analizar microalbúmina (200).

Las muestras fueron analizadas con ImmunoDip™ Urinary Albumin Test poco después de su recolección en el sitio de campo o, si estaban refrigeradas antes de ser analizadas, donde se les dejó alcanzar la temperatura ambiente antes de analizarlas. Los análisis con ImmunoDipTM Urinary Albumin Test fueron llevados a cabo por técnicos entrenados con diversos niveles de experiencia laboral y formación profesional. Todas las muestras fueron corridas antes de las 72 horas de su recolección.

En la evaluación, se detectaron 197 muestras que contenían menos de 18 mg/L de albúmina cuando se determinaron mediante un método cuantitativo en un analizador clínico y se reportaron como negativas de microalbuminuria. De estas, 187 también fueron negativas por ImmunoDipTM Urinary Albumin Test. De manera similar, 81 muestras mostraron niveles de albúmina iguales o por arriba de 18 mg/L y fueron reportadas como positivas por los resultados del analizador clínico. De estas, 77 también fueron positivas por ImmunoDipTM Urinary Albumin Test. Con base en estos datos, la concordancia fue de 95%.

Negativo (Analizador) Positivo (Analizador) Total Negativo ImmunoDipTM 187 4 191 Positivo ImmunoDipTM 10 77 87 Total 197 81 278

Concordancia: 95%

DESECHO

Cuando la prueba es completada, las muestras deben ser desechadas mediante las prácticas normales del laboratorio. La eliminación de las tiras usadas y no usadas debe hacerse de acuerdo a las regulaciones sanitarias.